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            小鼠小膠質BV2的培養步驟介紹

            更新時間:2022-03-28  |  點擊率:3409
              小鼠小膠質BV2“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間,與細胞世代或倍增不同。在一代中,細胞培增3~6次。細胞傳代后,一般經過三個階段:游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增Chemicalbook殖的旺盛程度,即細胞群的分裂相數/100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2%~0.5%,腫瘤細胞可達3~5%。接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力較好時期,稱指數增生期(對數生長期),適宜進行各種試驗。
              小鼠小膠質BV2的培養步驟介紹:
              1、培養基及培養凍存條件準備:
              1)準備DMEM培養基(DMEM,GIBCO,貨號11965-092),90%;胎牛血清,10%。
              2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度。
              3)凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
              2、細胞處理:
              1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
              2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
              3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
              對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
              1、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
              2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中,置于37培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
              3、按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
              4、將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
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